Receita simples para cromossomos humanos

O estudo dos cromossomos humanos tem grande importância, porque entre outros motivos algumas doenças estão diretamente relacionadas a alterações cromossômicas. Atualmente os cientistas têm condições de identificar pessoas com problemas cromossômicos e prever o risco de seus filhos vierem a ser afetados por doenças hereditárias.

A Citogenética, ramo da biologia que estuda os cromossomos é uma especialidade relativamente nova. Apenas em 1956 ficou definitivamente demonstrado que tanto homens quanto mulheres têm 46 cromossomos em cada uma das células.

A técnica mais empregada para o estudo dos cromossomos humanos baseia-se no cultivo, em tubo de ensaio, de um tipo de glóbulo brando do sangue, o linfócito.

Receita da técnica:

- Retira-se um pouco de sangue humano (Material mais utilizado é o linfócito especificamente, os linfócitos T do sangue periférico, pela simplicidade de coleta e facilidade de cultura e multiplicação in vitro, desde que adequadamente estimulados).

- As hemácias se separam por decantação.

- Retira o plasma com os linfócitos

- Acrescenta meio de cultura (1ml – Soro fetal, 100µm – Fitohemaglutinina)

- A Fitohemaglutinina induz a divisão dos linfócitos (mitose)

- Importante fazer em capela para não ser contaminado.

- Vedam-se os tubos (ependorfes) com para filme e coloca-se deitados (para ter maior area para o crescimento) em estufa 37ºC por 72h.

- Adiciona-se aos fracos uma substancia chamada colchicina, que bloqueia a divisão celular exatamente no estágio em que os cromossomos estão mais condensados, o que fica mais fácil observar.

- A colchicina impede a formação do fuso mitótico

- 45 minutos depois da colchicina, adiciona-se uma solução hipotônica que faz as células incharem.

- Agora é hora de adicionar o fixador que lisa as hemácias e para a hipotonização (coloração mais amarronzada que são os restos celulares)

- Leva-se para centrifuga, retira, coloca denovo... Até que os linfócitos fiquem bem precipitados no fundo do recipiente.

- Pode-se lavar com o fixador e colocar na centrifuga diversas vezes.

- Coleta os linfócitos e se deixa cair gotas dessa solução na lâmina de vidro para microscopia.

- É bacana as lâminas estarem bem lindas! Lava-se em água corrente e coloca-as submersas em água destilada na geladeira por 72h, antes da utilização.

- As células inchadas arrebentam e liberam os cromossomos, que aderem à lâmina e podem ser corados e examinados ao microscópio óptico.

- Pode-se então escolher os mais bonitos, tirar fotos, ampliar e recorta-los para serem organizados por ordem decrescente de tamanho de acordo com a posição dos centrômeros. Essa montagem é chamada de idiograma.

Resultado:

A figura abaixo mostra esquematicamente o que falamos:

Imagem retirada de http://www.teliga.net/2011/08/tecnicas-para-estudo-dos-cromossomos.html -> Nesse blog você encontra outras informações sobre o tema.

Colaboração: Jéssica Pires, Amanda Carmes, Natália Damazo, Alviani Kunzler e Mariana Iung - Participantes do projeto de extensão para confecção de laminário das práticas de citogenética da Universidade Federal de Santa Catarina. 

Abraços Citogenéticos!